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《Nature Protocols》一篇基质胶结合心脏形成类器官的论文
2021年08月27日

源自人类多能干细胞 (hPSC) 的心脏形成类器官 (HFO) 是一种复杂的、高度结构化的早期心脏、前肠和脉管系统发育体外模型。该模型代表了适用于各种应用的有效工具,包括致畸性研究、基因功能分析和药物发现。 最近,科研人员 提供了一个详细的 实验步骤 , 描述了如何在 14 d 内形成 HFO。在最初的 4 d 预培养阶段,hPSC 聚集体以 96 孔格式单独形成,然后嵌入 基质胶( Matrigel ) 。 随后,应用化学 WNT 通路调节剂 CHIR99021 和 IWP2,诱导定向分化。这种高度稳健的协议可用于许多不同的 hPSC 系 ,并与基因打靶和药物测试等操作技术相结合。 HFO 的形成可以通过多种互补方法进行评估,从各种成像方法到基因表达研究。在这里, 该团队重点介绍了基于流式细胞术的单个 HFO 分析,从而能够对谱系形成进行定量监测。



图 1:HFO 方案。



图 2:HFO 从 hPSC 分化的示意图。 从 MEF 培养物(步骤 1A–9)或单层冷冻原液(步骤 1B–9)的二维单层中生长的 hPSC 在分化日负 4 (d-4) 开始形成 HFO。在第 4 天,在超低附着 96 U 孔板的每孔中接种 5,000 个细胞,然后离心以在每孔中形成一个 hPSC 聚集体(步骤 10-13)。在第 2 天,将聚集体单独嵌入 基质胶 液滴中(步骤 14-21),然后使用小分子 CHIR99021 和 IWP2(步骤 22-27)进行分化。



图 3:MEF 和单层培养中 hPSC 的形态。



图 4:HFO 的预培养。



图 5:HFO 的区分。



相关论文以题为 Generation of heart-forming organoids from human pluripotent stem cells 发表在《 Nature Protocols 》上。 通讯作者 是 德国汉诺威医学院 Robert Zweigerdt 教授 。


参考文献 :

doi.org/10.1038/s41596-021-00629-8

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